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先全敲再条件性敲除(Knockout first, Conditional ready)小鼠模型


指同一个设计可以首先获得全基因敲除小鼠模型,与合适的工具小鼠交配后,还可以获得条件性敲除小鼠模型。而且在敲除目的基因的同时还能敲进报告基因。

先全敲再条件性敲除(Knockout first, Conditional ready)小鼠模型


1.概念

指同一个设计可以首先获得全基因敲除小鼠模型,与合适的工具小鼠交配后,还可以获得条件性敲除小鼠模型。而且在敲除目的基因的同时还能敲进报告基因。


2.优缺点

优点:(待讨论)通过报告基因的表达能够示踪目的基因的表达情况。

缺点:设计时需要对基因进行全面的分析,避免基因敲除导致内源性基因的表达下调或截短蛋白的表达。目的基因的全敲除可能引起胚胎致死或导致其他基因表达的调控紊乱,所以项目设计时需要充分分析此类风险。


3.原理

先全基因敲除再条件性基因敲除KO first conditional ready 设计方案是通过在内含子中插入一个基因破坏盒(一个带有剪切受体的报告基因和一个抗性基因,如图所示)来达到敲除的目的。除了基因破坏盒,在目的基因敲除的外显子两侧各插入一个loxP位点,因此得到的floxed(flanked by loxP)小鼠是敲除目的基因同时敲进报告基因与抗性基因的小鼠。根据实验需要,通过灵活选择Cre/LoxP重组系统或者Flp/FRT重组系统,可同时获得全基因敲除和条件性基因敲除小鼠模型。即当此floxed小鼠与全身表达Cre的小鼠交配时,可获得目的基因敲除同时敲进报告基因的小鼠。而当此floxed小鼠与Flp小鼠交配时,可修复已敲除基因的表达,在此基础上再与组织特异性表达Cre的小鼠交配又可获得目的基因条件性基因敲除的小鼠。 

打靶策略如下图:

 

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4.应用

通过报告基因的表达示踪所敲除目的基因的表达信息,方便基因研究;

药物的靶标确认;

药物的毒理学研究。

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