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条件性点突变小鼠模型-组织特异性(Tissue Specific)

2016-03-02 13:11:59.0

1.概念

指点突变能被引入特定细胞或组织中目的基因位置的小鼠模型。突变蛋白的表达水平及表达谱与野生蛋白的表达一致,并在小鼠的整个发育时期都有表达。


2.优缺点

优点:这种策略能够避免常规点突变导致的致死表型(胚胎干细胞致死、嵌合鼠致死或F1代杂合子小鼠致死),突变基因只在特定的细胞或组织中表达。

缺点:设计点突变策略时必须保证突变基因的表达水平及表达谱与野生基因的表达一致。


3.原理

条件性基因点突变主要是通过染色体位点特异性重组酶系统来实现的,如Cre-LoxP系统、 FLP-Frt系统和Dre-Rox系统等,其中最常用的是Cre-LoxP系统。这一系统是在待突变的一段目的基因序列的两端各放置一个LoxP序列,得到Floxed(Flanked by loxP)小鼠。该floxed小鼠在与表达Cre重组酶的小鼠杂交前,目的基因表达完全正常,从而能够避免全基因点突变可能出现的致死性表型。而当该floxed小鼠与组织特异性表达Cre重组酶的小鼠杂交后,即可获得目的基因在特定的组织或细胞中表达突变蛋白的小鼠,而该基因在其它组织或细胞中表达正常。

Floxed小鼠如果与不同的Cre重组酶小鼠杂交,可以使目的基因的突变发生在小鼠的任一组织或细胞中。此外,如果与控制Cre重组酶表达的诱导系统相结合,还可以使目的基因的突变发生在小鼠发育的任一阶段,实现对目的基因点突变的时空两方面调控


4.应用

致死性目的基因的研究;

药物的靶标确认;

药物的临床前评价。


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