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实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)模型


多发性硬化症(MS)是一种中枢神经系统慢性炎症性疾病,可导致脑炎和脱髓鞘发生。MS被认为是一种自身免疫性疾病,由自身反应性T细胞引起,症状包括肌肉僵硬和麻痹、视觉障碍和失明、感觉丧失和共济失调,具有反复复发的特征。目前有多种不同的MS动物模型,其中实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)模型由于具有和MS相似的炎症和脱髓鞘的病理特征,被广泛应用于多发性硬化症的研究。

在小鼠、大鼠等啮齿类动物中,可使用脊髓匀浆、纯化的髓鞘、髓鞘蛋白(如髓磷脂碱性蛋白MBP、蛋白脂蛋白PLP和髓鞘少突胶质细胞糖蛋白MOG)或这些蛋白的肽免疫诱导产生EAE模型。这可能是由于髓磷脂特异性T细胞在外周被激活,穿过血脑屏障进入中枢神经系统并被重新激活,引发一系列炎症反应,导致脱髓鞘和轴突细胞凋亡,最终导致神经损伤和失去功能。使用标准化评分系统评估临床症状,可衡量疾病的诱导发生程度,在病理组织染色切片中可见局部脱髓鞘和炎性白细胞浸润。

百奥赛图在野生C57BL/6小鼠和自主开发的B-hIL17A人源化小鼠上建立了MOG诱导的EAE疾病模型,可用于MS相关药物的药效评价。


EAE小鼠模型的构建


在C57BL/6小鼠中诱导EAE疾病模型


模型构建示意图


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临床评分


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在10周龄C57BL/6雌性小鼠(n=5)中使用MOG免疫,在免疫当天和第二天分别给与PTX。(A)各组动物体重变化趋势。(B)各组动物临床评分。结果显示,造模组(G2-MOG)与未造模组(G1-Vehicle)相比,出现尾无力、跛行、后肢麻痹等症状,临床评分上升。这说明在C57BL/6小鼠中成功诱导产生了EAE疾病模型。数据显示为平均值±SEM。MOG:髓鞘少突胶质细胞糖蛋白。PTX:百日咳毒素。


病理分析


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EAE模型小鼠的中枢神经系统(CNS)的局部炎症反应。在MOG和PTX免疫后第35天取脊髓,将组织切片进行H&E(A,B)染色及免疫荧光(IF)检测(C,D)(绿色:MBP;蓝色:DAPI)。结果显示,造模组炎症细胞浸润明显增加,髓鞘蛋白明显减少。这表明在C57BL/6小鼠中成功诱导产生了EAE疾病模型。


在B-hIL17A小鼠中诱导EAE疾病模型


模型构建示意图


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临床评分


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在10周龄B-hIL17A雌性小鼠(n=5)中使用MOG免疫,在免疫当天和第二天分别给与PTX。(A)各组动物体重变化趋势。(B)各组动物临床评分。结果显示,造模组(G2-MOG)与未造模组(G1-Vehicle)相比,出现尾无力、跛行、后肢麻痹等症状,临床评分上升。这说明在B-hIL17A小鼠成功诱导产生了EAE疾病模型。数据显示为平均值±SEM。


病理分析


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基于B-hIL17A诱导EAE模型小鼠的中枢神经系统(CNS)的局部炎症反应。在MOG和PTX免疫后第45天取脊髓,,将组织切片进行H&E(A,B)染色及免疫荧光(IF)检测(C,D)(绿色:MBP;蓝色:DAPI)。结果显示,造模组(G2-MOG)炎症细胞浸润明显增加,髓鞘蛋白明显减少。这表明在B-hIL17A小鼠中成功诱导产生了EAE疾病模型。


流式细胞术(FACS)检测淋巴结细胞


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取MOG和PTX免疫的B-hIL17A雌性小鼠(n=5)的淋巴结细胞,经布雷非德菌素A(BFA)处理后,用豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)和离子霉素(Ionomycin)同时刺激6小时后,用流式细胞术检测IL17A+和IFN-γ+细胞的数量。(A)FACS检测淋巴结细胞示意图。(B)各组动物中IL17A+CD3+CD4+ T细胞和IFN-γ+ T细胞数量。结果表明,B-hIL17A小鼠经MOG/CFA免疫后,淋巴结中的IFN-γ+ T细胞数量升高,IL17A+CD3+CD4+ T细胞数量显著升高。


流式细胞术(FACS)检测中枢神经系统(CNS)脑细胞


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取MOG和PTX免疫的B-hIL17A雌性小鼠(n=5)的CNS脑细胞,经布雷非德菌素A(BFA)处理后,用豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)和离子霉素(Ionomycin)同时刺激6小时后,用流式细胞术检测IL17A+和IFN-γ+细胞的数量。(A)FACS检测淋巴结细胞示意图。(B)各组动物中IL17A+CD3+CD4+ T细胞和IFN-γ+ T细胞数量。结果表明,B-hIL17A小鼠经MOG和PTX免疫后,脑细胞中的IL17A+CD3+CD4+ T细胞和IFN-γ+ T细胞均显著升高。


相关产品列表:


产品名称
产品编号
B-hIL17A mice
110053
B-hTNFA mice
110002


参考文献:


1. Gaffen, S.L., Jain, R., Garg, A.V. & Cua, D.J. The IL-23-IL-17 immune axis: from mechanisms to therapeutic testing. Nat Rev Immunol 14, 585-600 (2014).

2. Iwakura, Y. & Ishigame, H. The IL-23/IL-17 axis in inflammation. J Clin Invest 116, 1218-1222 (2006).

3. Kuwabara, T., Ishikawa, F., Kondo, M. & Kakiuchi, T. The Role of IL-17 and Related Cytokines in Inflammatory Autoimmune Diseases. Mediators Inflamm 2017, 3908061 (2017).